إنتاج حمض الليمون (حمض الستريك) بالطريقة السطحية:
وتقسم هذه الطريقة إلى مستويين أولهما المخبري, وثانيهما الصناعي التقني:
1- إنتاج حمض الليمون على المستوى المخبري:
1- تنشيط المزارع الفطرية (اللقاح):
يتم تنشيط السلالات الفطرية من فطريات Aspergillus niger بطريقة إنتاج المزارع الجرثومية المتتالية على بيئة بطاطا ديكستروز آجار Araga Desortaxed potato أو عن طريق تنمية أبواغ السلالات الفطرية على أصابع البطاطا بالطريقة التالية:
تقشر حبات البطاطا ويزال القسم المصاب ثم تقطع إلى أصابع على شكل متوازي مستطيلات بطول 5سم وأبعاد بحيث تدخل في أنابيب الاختبار بسهولة, ويبقى المجال مفتوحا لدخول إبرة التلقيح, ثم تغسل وتجفف من باقي ماء الغسيل. وتوضع ضمن الأنابيب المخبرية الزجاجية وتغلق هذه الأنابيب باستخدام ضماد طبي خاص بشكل مضغوط. ثم تضوع الأنابيب بعد ذلك في جهاز التعقيم بعد إطفائه وانخفاض الضغط ضمنه, وكذلك درجة الحرارة. وتنقل هذه الأنابيب المعقمة إلى غرفة العزل المعقمة بالطريقة السليمة المناسبة لهذه العملية باستخدام إبرة التلقيح بعد تعقيمها بالكحول ثم اللهب حتى تصبح بلون أحمر, عندها نقوم بنقل كمية قليلة من أبواغ الفطريات من المزرعة الأم إلى الأنابيب الجديدة ثم تغلق الأنابيب بالأغطية الخاصة بشكل محكم وتنقل إلى جهاز التحضين وتتم عملية التكاثر على درجة حرارة 30 مئوية لمدة أسبوع ثم تعاد التنشيط هذه المرتين على الأقل تصبح عندها أبواغ الفطريات في حالة التنشيط وجاهزة لعملية الزرع على الأوساط الزرعية.
تحضير المزارع الفطرية لعملية الزراعة السطحية على الأوساط الزرعية:
تخلط الأبواغ الفطرية للمزرعة الفطرية بكمية مناسبة من الفحم النشط الجاف المعقم تعقيماً جافاً على درجة حرارة 180 مئوية ولفترة 4 ساعات بهدف المحافظة على الأبواغ الفطرية طافية على سطح الوسط الزرعي السائل دون غرقها إلى قاع الوسط الزرعي.
2- طريقة تحضير الوسط الزرعي المولاسي:
تحسب كمية الوسط الزرعي اللازم لعمليات التخمير لجميع المعاملات المروغوب اختبارها وبثلاثة مكررات لكل معاملة وذلك لتحديد كمية المولاس اللازمة وغالباً ما تؤخذ كمية من المولاس ثلث كمية الوسط الزرعي ثم تمدد بالماء العادي حتى درجة 24 بركس, وهو ما يعادل نسبة سكريات حوالي 13% ثم يقاس نسبة السكريات المرجعة والكلية الموجودة في الوسط الزرعي بشكل دقيق. وبعد ذلك يتم ضبط درجة حموضة الوسط الزرعي pH على الدرجة 5.5 التي تعتبر مثالية للنمو الفطري على محلول المولاس بواسطة حامض الكبريت 2نظامي باستخدام جهاز الـpHمتر. تضاف بعد ذلك المكملات الغذائية التي تحضر بشكل مسبق على شكل محاليل تركيزها 10% كما في الجدول التالي:
http://img244.imageshack.us/img244/9358/13913669ib6.jpg
ويمزج الوسط الزرعي جيداً بهدف التجانس التام, بعدها يتم صبه بالكؤوس الزجاجية النظيفة والمعقمة بكميات 250 مل للكأس الواحد. تغلق الكؤوس الزجاجية بعد ذلك بالغطاء الخاص وتوضع بحذر في جهاز التعقيم الرطب وتعقم كما سبق ذكره.
3- طريقة تحضير الوسط الزرعي من السكروز:
يذاب السكر الأبيض في الماء العادي للحصول على كمية الوسط الزرعي اللازمة للمعاملات جميعا والمكررات بتركيز 13% سكروز, ثم تضبط درجة حموضة المحلول السكري وتضاف المكملات الغذائية حسب الجدول التالي:
تمزج المكملات الغذائية المحضرة سابقاً على شكل محاليل تراكيرها 10% ثم تجرى عليها الخطوات السابقة نفسها.
أما دراسة كمية الاحتياج الأمثل من نترات الأمونيوم كمصدر للآزوت لإنتاج حمض الليمون (حمض الستريك) في بيئة مولاس الشوندر السكري باستخدام أسلوب التخمير السطحي وإجراء مكررين لكل معاملة, فتجرى وفق جدول شامل لجميع المعلومات المجموعة من عدة تجارب بأرقام تسلسلية لكمية نترات الأمونيوم.
